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UV1901PC紫外可見分光光度計測牛奶中蛋白質(zhì)含量

納氏試劑分光光度法測定乳與乳制品中蛋白質(zhì)乳及乳制品是人們喜愛的常用保健食品，蛋白質(zhì)含量的高低是其重要指標(biāo)。蛋白質(zhì)的測量方法凱氏定氮蒸餾法，樣品消化后需要蒸餾滴定，操作繁雜，勞動力大，費時費力。納氏試劑分光光度比色法測定，方法簡便快捷，靈敏穩(wěn)定。與原方法經(jīng)T檢驗比較，無顯著性差異。

UV1901PC紫外可見分光光度計測牛奶中蛋白質(zhì)含量的原理

樣品中蛋白質(zhì)與硫酸和催化劑一同加熱分解，分解的氨與硫酸生產(chǎn)硫酸銨，硫酸銨與納氏試劑在堿性情況下生成黃至棕色化合物，與樣品氮含量成正比。結(jié)果乘以換算系數(shù)，從而計算樣品中蛋白質(zhì)含量。

UV1901PC紫外可見分光光度計測牛奶中蛋白質(zhì)含量需用到的試劑

硫酸  分析純  、硫酸鉀分析純、硫酸銅分析純 納氏試劑  溶解17g氯huagong于300ML水中，另溶解35g碘化鉀于100ml水中，將前液緩慢加入后液中至生成紅色沉淀為止，加入600ML200g/l*溶液和剩余的氯huagong，儲存于深色瓶，靜置數(shù)日，取上清液于另一深色瓶內(nèi)用橡皮塞塞緊，避光保存。硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液  精密稱取80℃干燥的硫酸銨4.71g溶于0.01mol/l硫酸溶液中并定容至1000ml。此溶液為1.0mg/ml NH3-N.臨用前用0.01mol/l H2SO4稀釋至10.0ug/ml NH3-N.所需用水均為離子交換水或無銨蒸餾水。

紫外可見分光光度計測牛奶中蛋白質(zhì)含量主要儀器

UV1901PC紫外可見分光光度計

UV1901PC紫外可見分光光度計測牛奶中蛋白質(zhì)的實驗方法

UV1901PC紫外可見分光光度計測牛奶中蛋白質(zhì)的樣品處理

精密稱取0。2~1.0g固體樣品或稱取5~10ml液體樣品于250ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸銅，3g硫酸鉀及10ml硫酸，搖勻后于瓶口放一小漏斗，傾斜置有小孔的石棉網(wǎng)隔熱的電爐上，先小火加熱，至樣品炭化泡沫停止后，加大火力至液體呈藍(lán)色澄清透明后，繼續(xù)加熱0.5h，取下放冷，小心加水，冷后分次洗入100ml容量瓶定容至刻度，準(zhǔn)確吸取5ml定容后樣品消化液于一100ml容量瓶，用水定容至刻度。即樣品消化液稀釋液備用，同時做試劑空白。準(zhǔn)確吸取2.0-5.0ml樣品消化稀釋液和等量空白消化液0.0、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、10.00ml分別于50ml納氏比色管內(nèi)，用0.01mol/l硫酸定容至刻度混勻，每管分別加入1.00ml納氏試劑，混勻，10min后420nm波長，1.0CM比色皿蒸餾水校正零點比色，繪制回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線。

計算樣品測定液和空白測定液中氮的含量

圖1

方法與討論

方法的線性范圍，相關(guān)系數(shù)

氮含量在0.1-2.0ug/ml范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)R=0.9993.

精密度試驗取2份奶粉各分別測定6次結(jié)果見表1。

回收率和精密度

向氨基酸口服液中加入標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回收率試驗，并進(jìn)行10次平行試驗計算平均回收率和精密度。回收率和精密度均相當(dāng)好。

方法應(yīng)用

應(yīng)用本方法測定了多份口服液、氨基酸沖劑、飼料等，方法重現(xiàn)性、回收率均令人滿意。

結(jié)語

不經(jīng)衍生直接測定樣品中游離氨基酸，分析速度快，靈敏度高，定性和定量準(zhǔn)確，適合各種樣品中游離氨基酸的測定。

UV1901PC紫外可見分光光度計法測定乳及乳制品中的蛋白質(zhì)含量，消耗試劑少，試劑成本低、降低勞動強(qiáng)度，能滿足基層工作需要、簡便、快速、靈敏、不失為一種好方法。